Жоба жетекшісі: Тойшибеков Ержан
Іске асыру мерзімі: 2024–2026 жж.
IRN: AP23488891
ЖОБА ТУРАЛЫ
Жобаның идеясы – барысты клондаудың негізгі аспектілері (Panthera uncia), яғни үй мысықтарының энуаклеацияланған жұмыртқаларын (Felis catus) пайдалану мүмкіндігі, сондай-ақ ядролық донор ретінде мұздатылған еріген соматикалық Барыс жасушаларын пайдалану және клондалған эмбриондардың дамуын зерттеу. Сондай-ақ, жоба витрификациядан кейін клондалған эмбриондардың өмір сүруін зерттеуді жоспарлап отыр. Жоба екі клондау әдісін салыстыруды жоспарлап отыр: Қолмен клондау әдісі және микроманипуляторларды қолдану арқылы клондау әдісі. Жобаның мультидисциплинарлығы мынада: қолданылатын әдістер ғылымның әртүрлі салаларына жатады: биология, жасуша биологиясы, эмбриология, көмекші репродуктивті технологиялар, биотехнология және криобиология. Жобаны іске асыру Қазақстанның жануарлар әлемінің генетикалық ресурстарының биоәртүрлілігін сақтау үшін iSCNT-әдісін пайдалану мүмкіндігін зерделеуге мүмкіндік береді. Жобаның мақсаты Барыстың соматикалық жасушаларының ядроларының (Panthera uncia) жануарлар әлемінің биоәртүрлілігін криосақтау үшін энуклеацияланған мысық жұмыртқаларына (Felis catus) тұқым аралық тасымалдануының негізгі аспектілерін зерттеу.
Жобаның міндеттері
1. Үй мысықтарының жетілмеген жұмыртқаларының in vitro жетілуіне мәдени ортаның әртүрлі құрамдарының әсерін зерттеу (IVM, in vitro maturation). Қоршаған орта құрамындағы әртүрлі компоненттердің әсерін зерттеу: FSH, LH, сарысулық альбумин, үй мысықтарының жұмыртқаларының in vitro пісуіне (in vitro maturation).
2. Zona pellucida жұмыртқаларын жою әдісін қолдану. Гиалуронидазаның әртүрлі концентрациясының үй мысықтарының жұмыртқа денудациясына әсерін зерттеу (кем дегенде 100 дана).
3. Үй мысықтарының жұмыртқа жасушаларының пронуклеусын жою үшін ортадағы демеколциннің әртүрлі концентрациясының тиімділігін зерттеу.
4. Микроманипуляторларды қолдана отырып, жұмыртқа пронуклеусын жою және соматикалық жасуша ядросын тасымалдау әдісін қолданудың тиімділігін зерттеу .
5. Цитопласттарды қалыптастыру үшін жетілген мысық жұмыртқаларының пронуклеусын жоюдың микрохирургиялық әдісінің тиімділігін зерттеу-қолдан жасалған Клонинг әдісі және микроманипуляторларды қолдану әдісі (Piezo Drill).
6. Цитопласттар мен соматикалық жасушаларды біріктіру үшін электр тогының әртүрлі комбинацияларының және химиялық әдістің әсерін зерттеу. 3 түрлі тұрақты ток комбинациясының (DC) және фитогемагглютининнің (PHE) әртүрлі концентрациясының үй мысықтарының цитопластары мен барыстың соматикалық жасушаларының бірігуіне әсерін зерттеу.
7. Әсерін зерттеу кальций ионофоры (CA Inophore)және оның әртүрлі концентрациялары клондалған эмбриондар мен сперматозоидтар сығындысының дамуына клондалған эмбриондарды белсендіруге.
8. Клондалған эмбриондардың (in vitro culture) даму барысына әртүрлі in vitro культура әдістерінің әсерін зерттеу. In vitro өсірудің екі түрлі әдісінің әсерін зерттеу: СО2 инкубаторында өсіру және суасты инкубациялық жүйесін (Submarine Incubation System, SIS) қолдану арқылы өсіру.
9. Бластоцистаның даму сатысына дейін in vitro өсіруден кейін клондалған эмбриондардың өміршеңдігін зерттеу.
10. -196 0С температурада витрификациядан кейін клондалған эмбриондардың өміршеңдігін зерттеу.
11. -205ОС температурада ультра жылдам витрификациядан кейін клондалған эмбриондардың өміршеңдігін зерттеу.
12. In vitro жетілу (IVM) және in vitro өсіру (IVC) бойынша үй мысықтарының жұмыртқаларына арналған нұсқаулықтарды дайындау. Іргелі зерттеулер үшін жаратылыстану ғылымдары саласындағы конкурстық құжаттаманың талаптарына сәйкес шетелдік рецензияланатын ғылыми журналдарда мақалалар жариялау.
Айта кету керек, клондау бойынша ғылыми зерттеулерді жүргізудің объективті алғышарттары пайда болды. Криобанкте сақталатын мұздатылған-еріген соматикалық Барыс жасушаларын (Panthera uncia) пайдалану мүмкіндіктерін зерттеудің шұғыл қажеттілігі туындады. Сондай – ақ, зерттеу нысаны Халықаралық Қызыл кітапқа енгізілген жойылып кету қаупі төнген түр болып табылатыны өте маңызды. Бұл біздің еліміздің жойылып бара жатқан жануарлардың биологиялық әртүрлілігін сақтауға үлес қосуға мүмкіндік береді. Сондай-ақ, ex situ жануарлардың осы түрін сақтап қана қоймай, мұздатылған гермоплазманы да ұтымды пайдаланыңыз. Зертхана қызметкерлерінің тағылымдамадан өтіп, Handmade cloning (соматикалық жасуша ядроларын тасымалдау) заманауи әдісін меңгергені үлкен маңызға ие. Біздің ғалымдар ұжымы жабайы арқардың соматикалық жасушаларының ядроларын тасымалдау бойынша алдын ала зерттеулер жүргізді және iscnt эмбриондарының дамуының оң алдын ала нәтижелері алынды.
ЖҰМЫС НӘТИЖЕЛЕРІ
2024 жыл қорытындысы бойынша
Үй мысықтарының жетілмеген жұмыртқа жасушаларының in vitro жағдайында жетілуіне (IVM, in vitro maturation) әртүрлі құрамдағы культуральды орталардың әсері зерттелді. Сонымен қатар, ортаның әртүрлі компоненттерінің: фолликулды стимулдаушы гормонның (FSH), лютеиндеуші гормонның (LH), сарысулық альбуминнің жұмыртқа жасушаларының жетілуіне әсері зерттелді. Гиалуронидазаның әртүрлі концентрацияларының жұмыртқа жасушаларын денудациялауға әсері қарастырылды. Жұмыртқа жасушаларынан zona pellucida қабатын жою әдісі пысықталды. Сондай-ақ, Narishige микроманипуляторларын (Piezo Drill) пайдалана отырып, жұмыртқа жасушаларының пронуклеусын жою және соматикалық жасуша ядросын тасымалдау әдісінің тиімділігі зерттелді.